CELI酶是一种单链、双链都特异识别的特异性核酸酶,目前CELI酶主要是从芹菜中提取,该酶可以特异性切割错配碱基,广泛应用于突变检测领域,传统理论认为该酶的催化活性只需要Mg2+和Zn2+。二硫苏糖醇,英文名DL-Dithiothreitol,简称DDT,分子式为C4H10O2S2,分子量为154.25,常用作还原剂,有抗氧化作用。今天小编来介绍DTT在制备CELI家族酶酶切缓冲液中的应用。
CELI家族酶酶切缓冲液由DTT、BSA(牛血清蛋白)、0.02%Triton X-100、0.1M KCl和HEPES缓冲液组成
其中:
含有DTT的CELI家族酶酶切缓冲液由Mutation DetectionKit-S100试剂盒缓冲液和DTT组成,Mutation DetectionKit-S100试剂盒缓冲液是美国环球基因公司的产品,产品目录号为706025;
DTT在CELI家族酶酶切缓冲液中的浓度为0.01-0.5mM、0.5-10mM或0.01-6mM;
BSA浓度为2ug/ml;
HEPES缓冲液浓度为0.1M、pH值为7.5。
新的催化活性物质DTT可以进一步提高CELI酶活,特别是对低丰度突变的检测,与传统的酶切方法相比,本发明的方法更为灵敏,DTT的终浓度在0.01-10mM范围内都可以提高CELI酶和CELII酶的检测灵敏度。对低丰度未知突变体的检测,如某癌症基因都有很好的检测效果,特别是TILLING技术平台检测诱变群体时,有明显优势,不仅仅简化了PCR纯化步骤,同时相应地提高了检测分辨率。
参考文献
CN106191228A DTT在提高CELI家族酶活性中的应用